技术简介

酵母双杂是一种利用酵母表达系统分析蛋白质相互作用的技术，它具有高度敏感性和广泛应用性。

技术原理

1、泛素 (ubiquitin) 可以分成两部分：N 端 (Nub) 和 C 端 (Cub);

2、Nub 与 Cub 有很强的亲和力，当在同一细胞同时表达时，Nub 与 Cub 会结合形成完整的泛素，会被泛素蛋白酶 (UBPs) 识别并切割 ;

3、Nub 第三位的异亮氨酸突变成甘氨酸后 (NubI → NubG)，Nub 与 Cub 的亲和力大大降低。

4、Cub 融合转录因子 LexA-VP16，诱饵构建在 Cub 上，猎物构建在 NubG 上 ;

5、当诱饵与猎物互作，使得 Cub 与 NubG 靠近而形成完整的泛素，UBPs 识别并切割 ;

6、被切下的转录因子 LexA-VP16 进入核内，启动报告基因 (His，Ade，LacZ) 的表达

技术优势

1、在体内原位检测蛋白 - 蛋白间的相互作用而无需核定位信号
2、使用小的泛素结构域 (NubG/Cub) 使得相互作用蛋白质之间的空间位阻最小化
3、蛋白间的互作信号靠泛素特异性结合蛋白 (UBPs) 剪切人工转录因子 (LexA) 启动，而不是靠转录，因此可以检测蛋白自身的转录激活或抑制序列
4、此体系可以用来研究两个膜蛋白的相互作用和一个膜蛋白与一个胞质蛋白的相互作用
5、任何一种膜蛋白都可以作为诱饵，能使与待检测蛋白融合的相互作用模块 (Cub-PLV-NubG) 定位在细胞质内
6、交付升级：增加报告基因 (LacZ) 进行更为严格的筛选，每个报告基因的上游调控区域各不相同，从而减少假阳性，提高互作可能性

样本要求

服务内容